Vật liệu thực vật và mầm bệnh
Một quần thể lập bản đồ hiệp hội lúa miến được gọi là quần thể chuyển đổi lúa miến (SCP) được cung cấp bởi Tiến sĩ Pat Brown tại Đại học Illinois (nay thuộc UC Davis).Nó đã được mô tả trước đây và là một tập hợp các dòng đa dạng được chuyển đổi sang trạng thái không nhạy cảm với ánh sáng và có tầm vóc nhỏ hơn để tạo điều kiện thuận lợi cho sự sinh trưởng và phát triển của thực vật trong môi trường Hoa Kỳ.510 dòng từ quần thể này đã được sử dụng trong nghiên cứu này mặc dù do khả năng nảy mầm kém và các vấn đề kiểm soát chất lượng khác nên không phải tất cả các dòng đều được sử dụng để phân tích cả ba tính trạng.Cuối cùng, dữ liệu từ 345 dòng được sử dụng để phân tích phản ứng chitin, 472 dòng cho phản ứng flg22 và 456 dòng cho tính kháng TLS.B. cookeichủng LSLP18 được lấy từ Tiến sĩ Burt Bluhm tại Đại học Arkansas.
Đo phản hồi MAMP
Hai MAMP khác nhau đã được sử dụng trong nghiên cứu này flg22, (Danh mục Genscript# RP19986) và chitin.Cây cao lương được trồng trong các ô đất đặt trên các mặt phẳng chứa đầy đất (33% Hỗn hợp trồng trọt Sunshine Redi-Earth Pro) trong nhà kính.Cây được tưới nước một ngày trước khi lấy mẫu để tránh độ ẩm của lá vào ngày lấy mẫu.
Các dòng được chọn ngẫu nhiên và vì lý do hậu cần nên được trồng theo đợt 60 dòng.Đối với mỗi dòng, ba 'chậu' được trồng với hai hạt trên mỗi dòng.Các lứa tiếp theo được trồng ngay sau khi lứa trước được xử lý cho đến khi toàn bộ quần thể được đánh giá.Hai lần chạy thử nghiệm đã được tiến hành cho cả hai MAMP với kiểu gen được sắp xếp lại ngẫu nhiên trong mỗi lần chạy.
Các xét nghiệm ROS đã được thực hiện như mô tả trước đây.Tóm lại, mỗi dòng sáu hạt được gieo vào 3 chậu khác nhau.Từ những cây con thu được, ba cây con đã được chọn dựa trên tính đồng nhất.Những cây con trông khác thường hoặc cao hơn hoặc thấp hơn đáng kể so với đa số đều không được sử dụng.Bốn đĩa lá có đường kính 3 mm được cắt ra từ phần rộng nhất của lá thứ 4 của ba cây lúa miến 15 ngày tuổi khác nhau.Một đĩa trên mỗi lá từ hai cây và hai đĩa từ một cây, với đĩa thứ hai trở thành đĩa kiểm soát nước (xem bên dưới).Các đĩa được thả nổi riêng lẻ trên 50 µl H20 trong đĩa 96 giếng màu đen, được bịt kín bằng màng nhôm để tránh tiếp xúc với ánh sáng và giữ ở nhiệt độ phòng qua đêm.Sáng hôm sau, dung dịch phản ứng được tạo ra bằng cách sử dụng đầu dò phát quang hóa học 2 mg/ml L-012 (Wako, danh mục số 120-04891), peroxidase cải ngựa 2 mg/ml (Loại VI-A, Sigma-Aldrich, danh mục số P6782), và 100 mg/ml Chitin hoặc 2 μM Flg22.50 µl dung dịch phản ứng này được thêm vào ba trong số bốn giếng.Giếng thứ tư là một đối chứng giả, trong đó dung dịch phản ứng không bao gồm MAMP được thêm vào.Bốn giếng trống chỉ chứa nước cũng được đưa vào mỗi đĩa.
Sau khi thêm dung dịch phản ứng, độ phát quang được đo bằng đầu đọc vi bản đa phát hiện SynergyTM 2 (BioTek) cứ 2 phút một lần trong 1 giờ.Máy đọc đĩa thực hiện các phép đo phát quang cứ 2 phút một lần trong 1 giờ này.Tổng của tất cả 31 số đọc đã được tính toán để đưa ra giá trị cho mỗi giếng.Giá trị ước tính cho phản ứng MAMP cho từng kiểu gen được tính bằng (giá trị phát quang trung bình của ba giếng thử nghiệm—giá trị giếng giả) -trừ giá trị giếng trống trung bình.Các giá trị giếng trống luôn gần bằng 0.
Đĩa lá củaNicotiana benthamiana, một dòng lúa miến phản ứng cao (SC0003) và một dòng lúa miến phản ứng thấp (PI 6069) cũng được đưa vào làm đối chứng trong mỗi đĩa 96 giếng nhằm mục đích kiểm soát chất lượng.
B. cookeichuẩn bị cấy và cấy
B. cookeichất cấy đã được chuẩn bị như mô tả trước đây.Tóm lại, hạt cao lương được ngâm trong nước trong ba ngày, rửa sạch, múc vào bình nón 1L và hấp trong một giờ ở nhiệt độ 15psi và 121°C.Sau đó, các hạt được cấy với khoảng 5 ml sợi nấm đã được ngâm từ môi trường nuôi cấy tươi.B. cookeiLSLP18 phân lập và để trong 2 tuần ở nhiệt độ phòng, lắc bình 3 ngày một lần.Sau 2 tuần, hạt lúa miến bị nhiễm nấm được sấy khô trong không khí và sau đó được bảo quản ở 4°C cho đến khi cấy vào ruộng.Chất cấy giống nhau đã được sử dụng cho toàn bộ thử nghiệm và được làm mới hàng năm.Để cấy, 6–10 hạt bị nhiễm bệnh được đặt vào các luống lúa miến 4–5 tuần tuổi.Các bào tử sinh ra từ những loại nấm này gây nhiễm trùng ở cây lúa miến non trong vòng một tuần.
Chuẩn bị hạt giống
Trước khi trồng trên đồng ruộng, hạt giống lúa miến đã được xử lý bằng hỗn hợp thuốc diệt nấm, thuốc trừ sâu và chất an toàn chứa ~ 1% thuốc diệt nấm Spirato 480 FS, 4% thuốc diệt nấm Sebring 480 FS, 3% chất an toàn cho hạt giống Sorpro 940 ES.Sau đó, hạt được phơi khô trong không khí trong 3 ngày để tạo ra một lớp phủ mỏng hỗn hợp này xung quanh hạt.Chất an toàn hơn cho phép sử dụng thuốc diệt cỏ Dual Magnum như một phương pháp xử lý trước khi nảy mầm.
Đánh giá khả năng kháng bệnh đốm lá mục tiêu
SCP được trồng tại Trạm nghiên cứu cây trồng trung tâm ở Clayton, NC vào ngày 14–15 tháng 6 năm 2017 và ngày 20 tháng 6 năm 2018 theo thiết kế khối hoàn chỉnh ngẫu nhiên với hai lần lặp lại thử nghiệm trong mỗi trường hợp.Thí nghiệm được trồng thành hàng đơn 1,8 m với chiều rộng hàng 0,9 m, sử dụng 10 hạt trên mỗi ô.Hai hàng viền được trồng xung quanh ngoại vi của mỗi thí nghiệm để ngăn chặn hiệu ứng rìa.Các thí nghiệm được tiêm chủng vào ngày 20 tháng 7 năm 2017 và ngày 20 tháng 7 năm 2018, tại thời điểm đó cây lúa miến đang ở giai đoạn tăng trưởng 3. Đánh giá được thực hiện theo thang điểm từ một đến chín, trong đó cây không có dấu hiệu bệnh được cho điểm là chín và hoàn toàn. cây chết được tính điểm là một .Hai xếp hạng được thực hiện vào năm 2017 và bốn lần đọc vào năm 2018 bắt đầu hai tuần sau khi tiêm chủng mỗi năm.sAUDPC (diện tích chuẩn hóa theo đường cong tiến triển bệnh) đã được tính toán như mô tả trước đây.
Thời gian đăng: Apr-01-2021